一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測豬肉中激素含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。

二、實驗目標物

醋酸甲羥孕酮(CAS:71-58-9)，睪酮（CAS:58-22-0）。

三、應用范圍

本方法適用于豬肉中激素檢測的HPLC檢測及確證。

四、實驗材料

SimplyGreen  HLB固相萃取柱60 mg/3 mL。

五、實驗步驟

1、樣品提取

準確稱取豬肉5.0g于50mL離心管中加入水20mL，甲醇5mL，渦旋1min，4500r/min離心5min，取上清

液，備用。

2、SPE柱凈化

(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用3mL甲醇、3mL水活化。

(2)上樣和洗脫：往固相萃取柱中加入提取備用液，棄去流出液；加入3 mL 35%甲醇水溶液淋洗，棄去淋洗液，抽干小柱；加6mL甲醇洗脫，收集洗脫液（整個上樣、洗脫過程保持流速1mL/min）。

(3)重新溶解：40℃緩慢氮氣流條件下吹至近干，用1mL甲醇溶解，經(jīng)0.22μm濾膜重新過濾，供HPLC測定。

3、HPLC條件

設備：Waters Alliance 2695

色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)

檢測器：Waters 2487 紫外檢測器

檢測波長：230 nm

流動相：A：乙腈B：水

洗脫方式：梯度洗脫

表1:梯度洗脫條件