動物源性食品中氯霉素檢測的固相萃取方法
一、實驗?zāi)康?span>
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，LC-MS/MS法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗?zāi)繕?biāo)物
氯霉素(CAS:56-75-7)。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于動物源性食品中氯霉素的LC-MS/MS檢測及確證。
四、參考標(biāo)準(zhǔn)
《GB/T
22338-2008動物源性食品中氯霉素類藥物殘留量測定》。
五、實驗材料
SimplyGreen C18固相萃取柱1000mg/6mL(Cat.No.)。
六、實驗方法
1、樣品提取
將稱取5
g豬肉試樣，精確到0.01 g。置于50 mL離心管中，加入5 mL水，于渦旋混合器上快速混合1 min，使試樣完全溶解。準(zhǔn)確加入15mL乙酸乙酯，在振蕩器上振蕩10 min，以3000r/min離心10 min，準(zhǔn)確吸取上層乙酸乙酯12 mL轉(zhuǎn)入15 mL的離心管中，置于濃縮吹氮儀在45 ℃吹掃蒸干，加入5 mL水溶解，待凈化。
2、SPE柱凈化
(1)活化：依次采用5 mL甲醇、5 mL水活化C18固相萃取柱。
(2)凈化：將提取液過C18固相萃取柱，待溶液完全流出后，用2×3 mL水過柱，然后再用5 mL乙腈:水(2:8, v/v)淋洗柱，棄去全部淋出液。用真空泵減壓抽干10 min。
(3)洗脫：用6 mL乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液于10 mL離心管中，于45℃用氮氣吹干液吹干，用乙腈:水(2:8, v/v)定容至1 mL，供LC-MS/MS上機測定。
3、LC-MS/MS條件
色譜柱：Venusil ASB C18(2.1×150mm，5 μm)
質(zhì)譜儀：API 4000
流動相：A:10 mmol/L乙酸銨溶液 B: 甲醇
流速：0.2 mL/min
柱溫：40 ℃
進樣體積:5 μL
離子源：電噴霧(ESI)，負(fù)離子模式
檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)
表1 質(zhì)譜儀離子源參數(shù)
|
Source/Gas
|
|
Collision
Gas(CAD)
|
6
|
|
Curtain
Gas(CUR)
|
30
|
|
Ion
Source Gas 1(GS 1)
|
50
|
|
Ion
Source Gas 2(GS 2)
|
50
|
|
Ion
Spray Voltage(IS)
|
-4500
|
|
Temperature(TEM)
|
550
|
|
Interface
Heater(ihe)
|
On
|
表2 氯霉素及內(nèi)標(biāo)的母離子和子離子參數(shù)表
|
保留時間
|
保留時間（min）
|
檢測離子對
|
DP
|
EP
|
CE
|
CXP
|
|
氯霉素
|
4.90
|
320.9/151.9
|
-60
|
-10
|
-25
|
-12
|
|
320.9/256.9
|
-60
|
-10
|
-25
|
-12
|
|
氯霉素-D5
|
4.90
|
326.1/157.0
|
-60
|
-10
|
-25
|
-12
|
|
七、實驗結(jié)果
|
|
1、2μg/kg豬肉基質(zhì)氯霉素添加回收結(jié)果
|
|
表3 2μg/kg豬肉基質(zhì)氯霉素添加回收結(jié)果
|
名稱
|
回收率（%）
|
平均回收率（%）
|
RSD（%）
|
|
1
|
2
|
3
|
|
氯霉素
|
98.31
|
96.28
|
90.61
|
95.07
|
4.20
|
|
2、添加水平為2μg/kg豬肉基質(zhì)中氯霉素檢測色譜圖
圖1 氯霉素及內(nèi)標(biāo)氯霉素-D5總離子流圖 圖2 氯霉素(CAP )(320.9/151.9)質(zhì)譜圖
圖3氯霉素-D5(CAP-D5)(326.1/157.0)質(zhì)譜圖
