葡聚糖凝膠色譜柱的原理
凝膠層析又稱分子排阻層析或凝膠過濾,是以被分離物質(zhì)的分子量差異為基礎的一種層析分離技術(shù),這一技術(shù)為純化蛋白質(zhì)等生物大分子提供了一種非常溫和的分離方法。層析的固定相載體是凝膠顆粒,目前應用較廣的是:具有各種孔徑范圍的葡聚糖凝膠(Sephadex)和瓊脂糖凝膠(Sepharose)。
葡聚糖凝膠是由直鏈的葡聚糖分子和交聯(lián)劑3—氯1,2—環(huán)氧丙烷交聯(lián)而成的具有多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的高分子化合物。凝膠顆粒中網(wǎng)孔的大小可通過調(diào)節(jié)葡聚糖和交聯(lián)劑的比例來控制,交聯(lián)度越大,網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)越緊密;交聯(lián)度越小,網(wǎng)孔結(jié)構(gòu)就越疏松,網(wǎng)孔的大小決定了被分離物質(zhì)能夠自由出入凝膠內(nèi)部的分子量范圍。這就使得能進入凝膠內(nèi)部與不能進入凝膠內(nèi)部的分子,如同按照分子大小過篩一樣,所以稱為分子篩。可分離的分子量范圍從幾百到幾十萬不等。
葡聚糖凝膠柱色譜的分離順序:操作時首先將凝膠在適宜的溶劑中浸泡,使其充分膨脹,然后再鋪成薄層,加入樣品后,再以同一溶劑洗脫,則樣品中大分子化合物不能進入凝膠顆粒內(nèi)部,只在凝膠顆粒間移動,因此阻力小,行動快,走在前面;而小分子化合物能自由擴散進入到凝膠內(nèi)部,因此在色譜時受到的阻力較大,行動慢,走在后面。如此經(jīng)過一段時間的洗脫,混合物中各組分就會按照分子的大小而獲得分離。
基于葡聚糖凝膠色譜柱的原理,葡聚糖凝膠色譜柱Simpsil Sephadex G-10對阿莫西林等頭孢類抗生素的分析效果很好。
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