一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測水產(chǎn)品中孔雀石綠含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。

二、實驗目標物

孔雀石綠(CAS:569-64-2) 。

三、應用范圍

本方法適用于鮮活水產(chǎn)品中孔雀石綠的檢測的HPLC檢測及確證。

四、參考標準

《GB/T 19857-2005水產(chǎn)品中孔雀石綠和結晶紫殘留量的測定》。

五、實驗材料

SimplyGreen N 中性氧化鋁固相萃取柱1000mg/3mL

六、實驗步驟

1、         樣品提取

準確稱取魚肉樣品5.0 g于50 mL離心管中，加入10 mL 乙腈，超聲波振蕩提取5 min， 渦旋1 min， 4000r/min離心5 min，上清液轉移至50 mL離心管中,殘渣按照上述步驟重復提取一次；合并兩次提取液，用乙腈定容至25 mL。

2、         SPE柱凈化

(1) 活化：中性氧化鋁固相萃取柱使用前用5 mL乙腈活化。

(2) 上樣和洗脫：在中性氧化鋁固相萃取柱上加入5 mL待凈化樣品，收集流出液，然后用4 mL乙腈洗脫，合并收集流出液。

(3) 重新溶解：流出液45 ℃氮吹至近干，1 mL乙腈定容，過0.45 μm濾膜，待上機測試。

3、HPLC條件

設 備：Waters Alliance 2690

色譜柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm，5μm)

檢測器 ：Waters 2487 紫外檢測器

流動相：A：乙腈 B：0.05 mol/L乙酸銨緩沖溶液

洗脫方式：梯度洗脫

表1 梯度洗脫條件