一、實驗?zāi)康?/b>
本研究利用固相萃取法作為樣品前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法操作方便，可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用。
二、實驗?zāi)繕宋?/b>
氫化可的松(CAS:50-23-7)。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于牛奶中氫化可的松的檢測及確證。
四、實驗材料
SimplyGreen Silica固相萃取柱500mg/6mL
五、實驗方法
1、樣品提取
稱取牛奶試料5 g于50 mL離心管中，加30 mL乙酸乙酯，均質(zhì)1 min，350 r/min搖床振動20 min，4200 r/min離心10 min，移取乙酸乙酯層。殘渣中加乙酸乙酯25 mL，均質(zhì)1 min，350 r/min搖床振動20 min，4200 r/min離心10 min，移取乙酸乙酯層。合并兩次提取液，40 ℃旋轉(zhuǎn)至近干，加乙酸乙酯1 mL和正己烷5 mL，溶解殘渣，待凈化。
2、SPE柱凈化
(1)活化：用6 mL正己烷活化Silica固相萃取柱。
(2)上樣和洗脫：取待測液，通過Silica固相萃取小柱富集，棄去流出液。用6 mL正己烷淋洗固相萃取柱，真空抽干5 min，棄去流出液。用6 mL正己烷-丙酮(6:4, v/v)洗脫萃取柱，收集洗脫液。
(3)重新溶解：洗脫液于40 ℃氮氣吹干，加20%乙腈水溶液2.0 mL溶解殘余物，過0.22 μm濾膜，供高效液相色譜測定。
3、HPLC條件
設(shè)備：Waters Alliance 2695
檢測器：Waters 2487 雙波長檢測器
檢測波長：254 nm
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18
(4.6X250mm)
流動相：A：乙腈
B：0.1%甲酸水溶液
洗脫方式：梯度洗脫
表1 梯度洗脫條件
流速：1 mL/min
進樣體積：20 μL
六、實驗結(jié)果
1、 牛奶中氫化可的松的1mg/kg添加回收結(jié)果
表2 牛奶中氫化可的松的1mg/kg添加回收結(jié)果
2、 添加水平為1mg/kg牛奶中氫化可的松檢測色譜圖
圖1 添加水平為1mg/kg牛奶中氫化可的松檢測色譜圖
